亲们,对于琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告_怎么进行琼脂糖电泳检测,很多人可能不是很了解。因此,今天我将和大家分享一些关于琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告_怎么进行琼脂糖电泳检测的知识,希望能够帮助大家更好地理解这个话题。
本文目录一览
琼脂糖凝胶电泳操作应注意哪些环节
1. 根据片段大小配制不同浓度的胶(改变分辨率),片段越小,需要胶浓度越大。2. 胶要现制先用。
3. 选择合适的Marker。
4. 配胶的缓冲液与电泳缓冲液要是同一种,且浓度一致(1倍)。
5. 点样时要加入loading buffer,并注意,不要将样点到点样孔之外(飘样),也不要将胶戳漏(漏样)。
6. 根据片段大小,及电泳检测目的,选择合适的电压及电泳时间。
7. EB染色。可选择制胶时加入EB(要在溶玩胶后,且温度至室温时(用手握住制胶容器,不烫手即可));或电泳结束后,将胶放入EB溶液中染色。
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤
一、实验目的
掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。
二、实验原理
RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时,配制普通的1% 琼脂 糖凝胶即可。
[图片上传失败...(image-ce5ff-1648627777991)]
三、实验材料、器具及
蘑菇的总RNA溶液。 电泳仪,电泳槽,电子 天平 , 移液器 ,枪头,微波炉,紫外透射检测仪等。 琼脂糖,1XTAE电泳缓冲液,0.5μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。
四、实验步骤
(1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶,加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
(2)在超净工作台上,用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在 实验台 上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液,混匀后,小心加入点样孔。
(3)打开电源开关,调节电压至100V,使RNA由负极向正极电泳,约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
[图片上传失败...(image-694142-1648627777991)]
[图片上传失败...(image-ae5e1b-1648627777991)]
RNA的变性琼脂糖凝胶检测
试剂 :
(1)MOPS缓冲液(10*):0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0),0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA 。
(2)上样染料:50%甘油,1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝,0.4%二甲苯蓝。
(3)甲醛。
(4)去离子甲酰胺。v电泳槽清洗:去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇 干燥 ——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。
操作:
(1) 将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍,晾干备用。
(2) 配制琼脂糖凝胶。
①称取0.5g琼脂糖,置干净的100ml 锥形瓶中,加入40ml蒸馏水,微波炉内 加热 使琼脂糖彻底溶化均匀。
②待胶凉至60--70 ℃,依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5ul 溴化乙锭,混合均匀。
③灌制琼脂糖凝胶。
(3) 样品准备:
① 取 DEPC处理过的500ul小离心管,依次加入如下试剂: 10x MOPS缓冲液2ul,甲醛3.5ul,甲酰胺(去离子)10ul,RNA 样品 4.5ul,混匀。
② 将离心管置于60℃水浴中保10分钟,再置冰上2分钟。
③ 向管中加入3ul 上样染料,混匀。
(4)上样。
(5)电泳:电泳槽内加入1XMOPS缓冲液,于7.5V/ml 的电压下电泳。
(6)电泳结束后,在紫外灯下检查结果。
总结:以上就是本站针对你的问题搜集整理的答案,希望对你有所帮助。如果您想更深入地了解相关内容,可以查看文章下方的相关链接。